Composição química do aço inoxidável 347 A magnitude do sangue venoso ou capilar, específico para SARS-CoV-2, as respostas das células T determinam a imunidade ao COVID-19.

Obrigado por visitar Nature.com.Você está usando uma versão de navegador com suporte CSS limitado.Para obter a melhor experiência, recomendamos que você use um navegador atualizado (ou desative o Modo de Compatibilidade no Internet Explorer).Além disso, para garantir suporte contínuo, mostramos o site sem estilos e JavaScript.
Sliders mostrando três artigos por slide.Use os botões voltar e avançar para percorrer os slides ou os botões do controlador de slides no final para percorrer cada slide.

Composição química do aço inoxidável 347

Composição química do tubo de bobina de aço inoxidável 347

A composição química e as propriedades mecânicas do tubo espiral de aço inoxidável 347 são as seguintes:
- Carbono – 0,030% máx.
- Cromo – 17-19%
- Níquel – 8-10,5%
- Manganês – 1% no máximo

Propriedades mecânicas do tubo de bobina de aço inoxidável 347

De acordo com o fabricante do tubo em espiral 347 de aço inoxidável, propriedades mecânicas do tubo em espiral 347:
- Resistência à tração (psi) – 75.000 min
- Força de rendimento (psi) – 30.000 min
- Alongamento (% em 2″) – 25% min
- Dureza Brinell (BHN) – 170 máx.

Aplicações e usos do tubo de bobina de aço inoxidável 347

• Tubo de bobina de aço inoxidável 347 usado em usinas de açúcar.
• Tubo de bobina de aço inoxidável 347 usado em fertilizantes.
• Tubo de bobina de aço inoxidável 347 usado na indústria.
• Tubo de bobina de aço inoxidável 347 usado em usinas de energia.
• Tubo de bobina de aço inoxidável 347 usado em alimentos e laticínios.
• Tubo de bobina de aço inoxidável 347 usado em plantas de petróleo e gás.
• Fabricante de tubos de bobina de aço inoxidável 347 usado na indústria de construção naval.

Acredita-se que as células T específicas do SARS-CoV-2 protejam contra a infecção e a progressão da COVID-19, mas não há evidências diretas disso.Aqui, comparamos medições de sangue total de células T positivas para interferon-γ específicas para SARS-CoV-2 com resultados positivos de testes de diagnóstico de COVID-19 (PCR e/ou fluxo lateral) dentro de 6 meses após a coleta de sangue de Lian.Entre os 148 participantes que doaram amostras de sangue venoso, a magnitude da resposta das células T específicas do SARS-CoV-2 foi significativamente maior naqueles que permaneceram protegidos do que naqueles que foram infectados (P <0,0001).% de risco de infecção, enquanto a alta intensidade reduziu esse risco para 5,4%.Esses resultados foram generalizados para mais 299 participantes que testaram um ensaio de sangue capilar escalonável que poderia facilitar o acesso a dados de imunidade de células T em escala populacional (14,9% vs. 4,4%).Assim, a medição de células T específicas para SARS-CoV-2 pode prever o risco de infecção e deve ser avaliada no monitoramento do estado imunológico individual e populacional.
Medir e compreender a resposta imunitária à infecção por SARS-CoV-2 é importante para desenvolver estratégias futuras eficazes para minimizar os impactos económicos e de saúde pública de futuros surtos de COVID-19.A identificação de correlatos imunológicos fornecerá informações importantes sobre a suscetibilidade de uma população à infecção viral, possivelmente alertando precocemente sobre picos de hospitalizações, e também permitirá que as pessoas gerenciem pessoalmente o risco de infecção e o risco de infectar outras pessoas.A vigilância imunológica tem se mostrado fundamental para avaliar a eficácia das vacinas contra a COVID-19 em pacientes saudáveis ​​e de alto risco1,2,3 especialmente em mutantes do SARS-CoV-24, e a detecção de imunocomprometidos significará a necessidade de aumentar a imunidade Vacinar-se e prevenir futuros surtos.
O nível de imunidade de um indivíduo à infecção por SARS-CoV-2 depende de múltiplos fatores: carga viral no momento da exposição, variantes do vírus, idade, vacinação/estado de infecção anterior, comorbidades, medicamentos e, mais importante, infecção anti-SARS-CoV .2 a resposta imune adaptativa ocorre no momento da exposição ao vírus5.A avaliação da resposta imunitária à infecção e/ou vacinação por SARS-CoV-2 centrou-se em ensaios serológicos que medem a presença de anticorpos específicos para uma proteína estrutural (por exemplo, glicoproteína spike).No entanto, a presença ou ausência de anticorpos por si só não determina com precisão uma resposta imunitária protetora, uma vez que as respostas são significativamente atenuadas ao longo do tempo6 e a neutralização das variantes do SARS-CoV-2 em indivíduos em recuperação ou duplamente vacinados Atividade fraca, o que pode levar a uma grande número de infecções emergentes7.De facto, a protecção contra a COVID-19 sintomática causada pela variante Omicron (B.1.1.529) diminuiu para cerca de 10% após apenas 4-6 meses de vacinação com mRNA, embora a protecção contra a doença grave tenha persistido >68% durante pelo menos 7 meses8.Medir as respostas das células T de memória adaptativa, que conferem protecção a longo prazo contra a infecção viral, é o melhor indicador de susceptibilidade à infecção por SARS-CoV-2 e, portanto, uma melhor indicação do risco de teste positivo para COVID-199, uma vez que T específico células podem prevenir a infecção.sem soroconversão10,11.No entanto, a medição das respostas das células T tem recebido menos atenção devido a dificuldades metodológicas e problemas logísticos na obtenção e transporte de amostras de sangue venoso, especialmente quando se realizam grandes estudos observacionais para avaliar a eficácia da vacina e monitorizar a imunidade.No entanto, os indivíduos vacinados apresentam atividade robusta das células T contra variantes do SARS-CoV-2, compensando potencialmente a perda de reatividade dos anticorpos para limitar a gravidade da COVID-1912,13.
Aqui, procuramos entender se uma única medição da resposta das células T SARS-CoV-2 poderia prever o risco absoluto de infecção por SARS-CoV-2 dentro de 6 meses após a coleta de sangue, independentemente de fatores de influência imunológica anteriores.Para tornar o teste de células T de alto rendimento e aplicável a estudos maiores, também tentamos fazer o teste miniaturizado para que pudesse ser realizado usando uma amostra de sangue capilar por punção digital.
Medimos as respostas imunes celulares e humorais em doadores saudáveis ​​usando uma detecção combinada de células T SARS-CoV-2 e anticorpos IgG com base em sangue venoso total (para características dos participantes, consulte março de 2022 14. Em doadores vacinados, SARS-CoV-2- respostas específicas de células T foram determinadas medindo os níveis plasmáticos de interferon-γ (IFN-γ) após estimulação do sangue total com o peptídeo SARS-CoV-2 (como anteriormente, refs. 14,15,16,17,18) e respostas de IgG associadas com nucleocapsídeo (N) foram aumentados naqueles que relataram uma infecção anterior, embora ambas as respostas tenham sido maiores em doadores não vacinados previamente infectados, máximo no corpo (Fig. 1a, b).Respostas de IgG contra glicoproteínas spike (RBD, S1, S2) foram maiores em doadores vacinados previamente infectados (Figura 1c – e).
as respostas de células T IFN-γ+ específicas para SARS-CoV-2 foram medidas por ensaio de sangue total venoso e com base nas vacinações dos participantes e no status de infecção anterior por SARS-CoV-2 (confirmado por PCR e/ou teste de fluxo lateral)' Vac + /Inf +' n = 60 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 82 (azul), 'Vac-/Inf +' n = 4 (amarelo), 'Vac-/Inf-' n = 1 (não aplicado).As reações de ligação de IgG específicas para SARS-CoV-2 têm como alvo o nucleocapsídeo (“N”) (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), domínio de ligação ao receptor fortificado (“RBD”) (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), subunidade de pico 1 (“S1”) (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012) e pico da subunidade 2 (“S2”) (e) foram medidos por exames de sangue total venoso e com base na vacinação dos participantes e SARS -CoV-2 prévio (confirmado por PCR e/ ou teste de fluxo lateral) estado infeccioso.'Vac + /Inf +' n = 60 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (azul), 'Vac-/Inf +' n = 4 (amarelo).As comparações foram feitas pelo teste de Kruskal-Wallis, ajustado para comparações múltiplas pelo teste de Dunn.Os dados são exibidos como gráficos (linha central na mediana, limite superior no percentil 75, limite inferior no percentil 25) com bigodes nos valores mínimo e máximo.Cada ponto representa um doador.Os dados brutos são fornecidos na forma de arquivos de dados brutos.
Após a coleta de sangue, os participantes foram solicitados a relatar resultados positivos de PCR e/ou teste de fluxo lateral para COVID-19;se os participantes testaram positivo entre 1 de setembro de 2021 e 29 de dezembro de 2021, presumiu-se que estavam infectados com a variante Delta (B.1.617.2) do coronavírus e Omicron (B.1.1.529) para a Saúde Pública do País de Gales após 29 de dezembro de 2021, quando esta opção de preocupação torna-se dominante.Entre 148 doadores avaliáveis, observamos uma taxa de infecção de 26,3% (39/148) dentro de 6 meses após a doação de sangue, 38 dos quais receberam uma segunda ou terceira dose da vacina COVID-19 (o avanço da infecção ocorreu após a Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) vacina de mRNA ou vacina AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));um doador não vacinado também foi infectado.A magnitude das respostas de células T positivas para IFN-γ específicas para SARS-CoV-2 foi significativamente menor naqueles que relataram um teste de diagnóstico positivo para COVID-19 do que em doadores não infectados (P <0,0001; Fig. 2a), principalmente devido a indução ideal de respostas de células T por vacinação em alguns participantes (P = 0,050; Figura Complementar 1).Não houve correlação entre a magnitude da resposta das células T IFN-γ + e o tempo para um resultado positivo do teste COVID-19 (Figura 2 suplementar).Em contraste, nem as respostas de IgG de ligação a RBD, S1, S2 (Figuras 2b-d) nem as respostas de anticorpos neutralizantes de RBD e S1 foram específicas para SARS-CoV-2 de tipo selvagem ou delta (B.1.617).) (Figura 3 suplementar) pode distinguir entre pessoas em risco de infecção.No entanto, baixas respostas de IgG ligadas a N contra SARS-CoV-2 correlacionaram-se com o risco de infecção por COVID-19 (P = 0,0084; Figura 2e);aqueles que testaram positivo tiveram 85% menos probabilidade (P = 0,00035; OR 0,15, 95).% CI: 0,047–0,39 (Figura Suplementar 4).
Amostras de sangue venoso de doadores saudáveis ​​(n = 148) avaliaram as respostas de células T IFN-γ+ específicas para SARS-CoV-2 (a; ****P < 0,0001) e a ligação do receptor Spike ao SARS-CoV específico -2 estímulo.domínio (“RBD”) (b), subunidade do pico 1 (“S1″) (c), subunidade do pico 2 (“S2″) (d) e nucleocapsídeo (“N”) (e; **P = 0,0084) .Participantes que testaram positivo para COVID-19 (PCR e/ou fluxo lateral) identificados;todas as infecções ocorreram dentro de 6 meses após a coleta de sangue.As comparações foram feitas usando um teste de Mann-Whitney bicaudal.Os dados são exibidos como gráficos (linha central na mediana, limite superior no percentil 75, limite inferior no percentil 25) com bigodes nos valores mínimo e máximo.Cada ponto representa um doador.ns não é importante.O mapa de calor f mostra as correlações de classificação de Spearman entre variáveis ​​para o conjunto de dados especificado.As comparações que não foram estatisticamente significativas foram excluídas da matriz e marcadas com células em branco.Os dados brutos são fornecidos na forma de arquivos de dados brutos.
O ponto de corte positivo de diagnóstico predefinido de 14 foi considerado demasiado arbitrário para avaliar o risco de reinfecção, pelo que foram estabelecidos intervalos interquartis para estabelecer parâmetros de risco absolutos.O modelo estatístico, que incluiu apenas variáveis ​​que tiveram efeito significativo nos resultados, mostrou que a magnitude da resposta das células T IFN-γ+ específicas do SARS-CoV-2 foi o biomarcador imunológico mais importante para determinar as chances de um indivíduo ser testado para COVID.-19 positivo (Figura 2f e Figura Suplementar 4).Pacientes com resposta de células T IFN-γ+ específica para SARS-CoV-2 no terceiro (194-489 pg/ml IFN-γ) e quarto (>489 pg/ml IFN-γ) quartis 65% (P = 0,055; OR 0,35, IC 95%: 0,11–1,00) e 90% (P = 0,0050; OR 0,098, IC 95%: 0,014–0,42) tiveram mais participantes.As chances são pequenas (Fig. Complementar 4).No geral, os participantes com uma resposta de células T específica para SARS-CoV-2 de sangue venoso ≤79 pg/mL de IFN-γ tiveram um risco de 43,2% de infecção invasiva em 6 meses, em comparação com uma resposta >489 pg/mL.ml de IFN-γ apresentou risco de infecção de 5,4% (tabela 2).
O exame de sangue total venoso tem escopo limitado devido à necessidade de coleta de amostra pelo flebotomista.Para aumentar a disponibilidade de testes de células T e IgG para SARS-CoV-2, foi desenvolvido um método alternativo de amostragem de sangue capilar para permitir que os participantes obtenham amostras de sangue por punção digital em casa.Até onde sabemos, não houve relatos anteriores sobre a medição da função das células T específicas do antígeno em amostras de sangue capilar.Uma forte correlação foi anteriormente demonstrada entre contagens de linfócitos obtidas utilizando amostras de sangue capilar e venoso comparáveis.Além disso, foi relatado que ensaios baseados em sangue total que medem as respostas de células T específicas do SARS-CoV-2 usam apenas 320 μL de sangue venoso,20 eliminando preocupações sobre a frequência de células T progenitoras em amostras de sangue capilar.
Usamos este ensaio colaborativo padronizado de alto rendimento de células T SARS-CoV-2 e anticorpos IgG com base em sangue total capilar para medir a resposta imune celular e humoral em participantes com várias comorbidades e estado de vacinação/infecção anterior (Tabela 1).recrutados em todo o Reino Unido entre 24 de janeiro e 14 de março de 202214. A maioria (90,9%) das amostras de dedos foram obtidas corretamente e enviadas ao laboratório dentro de 24 horas após a coleta.Em alguns casos, as amostras foram recebidas dentro de 48 horas após a coleta de sangue, mas nenhuma dessas amostras passou nas verificações de controle de qualidade e não afetou as medições gerais de células T ou anticorpos (Figura 5 suplementar).Embora houvesse diferenças na magnitude da resposta de células T IFN-γ+ específicas para SARS-CoV-2 medida nas respectivas amostras de sangue capilar e venoso em alguns indivíduos, não houve diferenças significativas em geral (P = 0,88; Figura 6 suplementar). ).).
As respostas de células T IFN-γ+ específicas para SARS-CoV-2 foram significativamente aumentadas em indivíduos vacinados que também relataram uma infecção anterior (P = 0,0001), mas não significativamente maiores do que em indivíduos doadores não vacinados previamente infectados (P = 0,19, Fig. 3a).).As respostas de IgG contra a glicoproteína spike (RBD, S1, S2) foram significativamente maiores em doadores vacinados do que em doadores não vacinados, independentemente do estado de infecção anterior (Figura 3b-d).Curiosamente, a resposta média de IgG ligada a N foi mais elevada em participantes não vacinados previamente infectados em comparação com participantes vacinados, embora isto não tenha atingido significância (Figura 3e).Entre os doadores não vacinados e não infectados que se autodeclararam, 15 dos 37 (40,5%) participantes foram positivos para IgG N-ligada, acima do limite previamente estabelecido de 2,0 BAU/mL14;esses 15 participantes Doze desses pacientes testaram positivo para resposta de células T IFN-γ+ acima do limite previamente estabelecido de 22,7 pg/mL de IFN-γ14.Portanto, é provável que esses participantes estivessem previamente infectados pelo SARS-CoV-2 e não tenham sido testados para COVID-19 por escolha pessoal, falta de equipamento de PCR e/ou fluxo lateral, ou fossem assintomáticos.Embora tenha havido uma correlação significativa entre as respostas das células T aos níveis de IFN-γ + e IgG ligada a N em doadores não vacinados (P = 0,0044; Figura Suplementar, a resposta de IgG ligada a N diminuiu mais rapidamente do que a resposta de IgG ligada a N, enquanto o IFN-γ + As respostas das células T foram mantidas independentemente do estado de vacinação, embora o número de doadores às 50 semanas pós-desafio tenha sido baixo (Figura 8 suplementar). O tipo de vacinação foi geralmente pouco diferente nas respostas de IgG específicas observadas para SARS-CoV-2, T células e associadas a RBD, embora os participantes que receberam duas doses de BNT162b2 seguidas de revacinação com mRNA1273 tenham mostrado níveis significativamente mais altos de células T IFN-γ + foram mais sensíveis ao SARS-CoV-2 do que aqueles que receberam duas doses de ChAdOx1 e BNT162b2 (Suplementar Figura 9) Além disso, as comorbidades relatadas tiveram pouca diferença geral nas respostas observadas das células T em comparação com doadores saudáveis ​​(Figura 10 suplementar).
as respostas de células T IFN-γ+ específicas para SARS-CoV-2 foram medidas por ensaio capilar de sangue total e foram baseadas nas vacinações dos participantes e no estado infeccioso prévio de SARS-CoV-2 (confirmado por PCR e/ou teste de fluxo lateral).'Vac + /Inf +' n = 42 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 158 (azul), 'Vac-/Inf +' n = 33 (amarelo), 'Vac- /Inf-' n = 37 (cinza).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- vs. Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac- /Inf-) P = 0,014 .Reações de ligação de IgG específicas do SARS-CoV-2 ao domínio de ligação ao receptor de espícula (“RBD”) (b; ****P < 0,0001, ns: não significativo), subunidade 1 de espícula (“S1”) (c; * * **P < 0,0001, ns: não significativo), subunidade 2 (“S2″) (d; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016) e nucleocapsídeo (“N”) (e; ****P < 0,0001, ns não significativo) foram medidos usando análise de sangue total venoso e com base nas vacinações dos participantes e SARS-CoV-2 anterior (confirmado por PCR e/ou análise de fluxo lateral). status.'Vac + /Inf +' n = 46 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 182 (azul), 'Vac-/Inf +' n = 34 (amarelo), 'Vac-/Inf-' n = 37 (cinza).As comparações foram feitas pelo teste de Kruskal-Wallis, ajustado para comparações múltiplas pelo teste de Dunn.Os dados são exibidos como gráficos (linha central na mediana, limite superior no percentil 75, limite inferior no percentil 25) com bigodes nos valores mínimo e máximo.Cada ponto representa um doador.Os dados brutos são fornecidos na forma de arquivos de dados brutos.
Como antes, os participantes foram solicitados a relatar resultados positivos de PCR e/ou fluxo sanguíneo lateral para COVID-19;de acordo com a Agência de Saúde do Reino Unido, presumiu-se que os participantes estavam infectados com o coronavírus Omicron (B.1.1.529) no momento do teste da variante positiva do vírus, uma vez que era a variante dominante no Reino Unido durante o período do estudo.Entre 299 doadores avaliáveis, observamos uma taxa de infecção de 8,0% (24/299) dentro de três meses após a doação capilar, sete dos quais não foram vacinados.A proporção de comorbidades entre todos os participantes foi menor naqueles que testaram positivo para COVID-19 (10,7%) do que naqueles que testaram negativo para COVID-19 (24,4%, Tabela 1), o que pode ser devido ao fato de os participantes com certos doenças são mais cuidadosas e protegem contra possíveis consequências, como diabetes e câncer.Conforme observado em uma coorte de sangue venoso, células T positivas para interferon-γ (IFN-γ) específicas para SARS-CoV-2 foram medidas em amostras de sangue capilar de indivíduos que relataram um teste de diagnóstico positivo para COVID-19.A magnitude da resposta foi significativamente menor do que em doadores não infectados (P = 0,034; Figura 4a) devido à indução relativamente fraca de uma resposta de células T por vacinação e/ou infecção prévia (Figura 11 suplementar).Da mesma forma, nem as respostas de IgG de ligação a RBD, S1, S2 (Figuras 4b-d) nem as respostas de anticorpos neutralizantes de RBD e S1 foram específicas para SARS-CoV-2 de tipo selvagem ou delta (B. 1.617).(Figura complementar 12).Indivíduos com qualquer risco significativo de infecção podem ser identificados.Em contraste com a coorte venosa, as respostas de IgG relacionadas ao N também não diferenciam o risco de COVID-19 (Figura 4e), sugerindo que a variante Omicron (B.1.1.529) aumenta a evasão imunológica em indivíduos previamente infectados, conforme descrito recentemente 21. Em contraste, a força da resposta das células T IFN-γ específicas do SARS-CoV-2 foi novamente a variável mais importante na determinação das probabilidades individuais de teste positivo para COVID-19 (Figura 4f).No geral, os participantes com uma resposta de células T capilares específica para SARS-CoV-2 ≤23,7 pg/mL de IFN-γ tiveram um risco de infecção de 14,9% em três meses em comparação com uma resposta >141,6 pg/mL.ml de IFN.-γ apresentou risco de infecção de 4,4% (Tabela 2).
Respostas de células T IFN-γ + específicas para SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) e domínio de ligação ao receptor direcionado a IgG específico de SARS-CoV-2 (“RBD”) (b), subunidade de pico 1 (' S1′) (c), subunidade spike 2 ('S2′) (d) e reação de ligação ao nucleocapsídeo ('N') (e).Participantes identificados como positivos para testes de COVID-19 (PCR e/ou teste de fluxo sanguíneo lateral), todas as infecções ocorreram dentro de 3 meses após a coleta de sangue.As comparações foram feitas usando um teste de Mann-Whitney bicaudal.Os dados são exibidos como gráficos (linha central na mediana, limite superior no percentil 75, limite inferior no percentil 25) com bigodes nos valores mínimo e máximo.Cada ponto representa um doador.ns não é importante.O mapa de calor f mostra as correlações de classificação de Spearman entre variáveis ​​para o conjunto de dados especificado.As comparações que não foram estatisticamente significativas foram excluídas da matriz e marcadas com células em branco.Os dados brutos são fornecidos na forma de arquivos de dados brutos.
À medida que avançamos para a próxima fase da pandemia da COVID-19, o foco passará da prevenção para a gestão de riscos individuais e para a identificação de membros vulneráveis ​​da sociedade.Estabelecer correlações de imunidade à COVID-19 é fundamental para identificar e tratar eficazmente estes grupos de alto risco.Existem agora evidências crescentes de que a imunidade das células T protege contra a infecção por SARS-CoV-2 e limita a gravidade da COVID-1910.Os dados aqui apresentados demonstram que a força combinada das respostas das células T IFN-γ+ específicas do SARS-CoV-2 contra proteínas estruturais de espícula, membrana e nucleocapsídeo conferem maior proteção contra COVID-19 do que a ligação de anticorpos.19 promovem ou neutralizam respostas .e devem ser levados em consideração na avaliação da imunidade individual e/ou coletiva.Os vírus RNA, como o SARS-CoV-2 ou o vírus influenza A (IAV), evitam a neutralização sorológica ao evoluir rapidamente epítopos de células B expostas em antígenos de superfície reconhecidos por anticorpos.A resposta imune protetora fornecida pelas células T pode refletir o direcionamento de epítopos de regiões mais conservadas de proteínas virais que não conseguem escapar rapidamente de uma resposta imune.A proteção mediada por células T contra novas variantes do SARS-CoV-2 é semelhante à proteção heterosubtípica mediada pelo direcionamento de células T de proteínas intrínsecas conservadas observadas nos subtipos IAV22,23.
Apesar do enorme potencial para medir a resposta imune celular ao COVID-19, relativamente pouca atenção tem sido dada ao desenvolvimento de ensaios de células T padronizados, precisos e de alto rendimento.As complexidades e custos tradicionais associados à medição das respostas das células T impedem a determinação precisa da imunidade das células T ao rastrear a imunidade de uma grande população.Embora vários ensaios comerciais de estimulação de peptídeos no sangue total tenham sido disponibilizados recentemente, atualmente todos exigem um flebotomista para obter sangue, limitando a disponibilidade e a escala.Os sistemas de sangue capilar são amplamente utilizados para determinar a prevalência de anticorpos SARS-CoV-2 em uma população.Adaptamos ensaios de sangue capilar para realizar ensaios de estimulação de peptídeos no sangue total para avaliar a reatividade das células T às proteínas estruturais do SARS-CoV-2 e às respostas de anticorpos específicos do SARS-CoV-2.Na verdade, a medição combinada de anticorpos específicos para SARS-CoV-2 e células T na mesma amostra de sangue capilar é muito atrativa: (i) reduz a necessidade de múltiplos exames de sangue por participante, (ii) melhora a experiência e compreensão do participante;(iii) melhorar a logística e reduzir a duplicação, (iv) reduzir o impacto ambiental, uma vez que são necessários menos consumíveis laboratoriais e entrega de amostras.Embora a reatividade geral do IFN-γ tenha sido semelhante entre amostras de sangue venoso e capilar correspondentes, observou-se que era menor na coorte de sangue capilar dos participantes (Fig. 4a) em comparação com a coorte de sangue venoso (Fig. 2a).Valores de IFN-γ Existem várias explicações para este achado, nomeadamente, um grande número de participantes com comorbidades que necessitam de terapia imunossupressora foram recrutados para a coorte de amostragem de sangue capilar (Tabela 1) e Viabilidade e/ou função de células T obtidas de células vasculares as amostras podem ser baixas, especialmente tendo em conta as condições de armazenamento a longo prazo das amostras antes da estimulação peptídica.
A vacina contra a COVID-19 atualmente amplamente disponível oferece a melhor proteção contra doenças graves para a maioria dos receptores no prazo de 6 meses após a vacinação8.De forma encorajadora, apesar da fraca neutralização serológica induzida pela vacina das variantes SARS-CoV-26,7, as respostas das células T induzidas pela vacinação contra o SARS-CoV-2 de tipo selvagem permaneceram altamente reativas, à medida que surgiram outras 25.Os dados que aqui apresentamos demonstram a importância de uma avaliação mais ampla da imunogenicidade da vacina, destacando vacinas com imunidade insuficiente de células T para prevenir a infecção súbita e a transmissão persistente do vírus.Observamos também que muitos indivíduos não vacinados recrutados para a coorte capilar tiveram uma resposta significativa de células T específicas para SARS-CoV-2 (e IgG de ligação a N), independentemente da vacinação anterior, o que provavelmente é devido a infecção anterior.Em vez de vacinar os indivíduos apropriados, o seu risco de infecção deve ser avaliado com base no seu actual estado de imunização e nas escolhas informadas feitas.
As limitações deste estudo incluem a garantia de que os participantes relataram infecção por SARS-CoV-2 após a coleta de sangue para determinar a relevância da imunidade;alguns participantes podem ter infecção assintomática e não podem ser submetidos a PCR e/ou teste de fluxo lateral para COVID-19.Nosso conjunto de dados também carecia de informações sobre os medicamentos dos participantes no momento da coleta de sangue.Além disso, dado que todos os nossos participantes relataram apenas sintomas leves/moderados ou nenhum sintoma, não foi possível identificar respostas imunológicas do nosso conjunto de dados que previssem um risco aumentado de doença grave e hospitalização por COVID-19.No entanto, a presença de respostas de células T CD8+ contra epítopos específicos do nucleocapsídeo foi recentemente associada à proteção contra COVID-1926 grave.Além disso, o ensaio aqui utilizado não mediu as respostas das células T a proteínas não estruturais específicas do SARS-CoV-2 expressas precocemente, que recentemente demonstraram acumular-se preferencialmente em profissionais de saúde seronegativos que estiveram em contacto com pacientes infectados.Com base neste trabalho, dada a prevalência da transmissão comunitária no momento do recrutamento e a elevada probabilidade de infecção por contacto na população, o número de células T específicas do SARS-CoV-2 encontradas nos nossos testes também parece ser capaz de ser eliminado.infecções subclínicas em nossas coortes.Finalmente, não medimos a produção de interleucina 2 pelas células T porque nosso trabalho anterior demonstrou má identificação de respostas de células T específicas para SARS-CoV-214, embora as respostas específicas de IL-2 possam indicar reatividade cruzada pré-existente.células associadas à defesa contra a infecção por SARS-CoV-211.
Tomados em conjunto, estes dados destacam a necessidade fundamental de estudos longitudinais de longo prazo que incorporem respostas de células T específicas do SARS-CoV-2 em medidas de imunidade à escala populacional.Estes esforços podem ser auxiliados pelo desenvolvimento de um novo exame de sangue capilar que mede a resposta das células T.
O projeto de pesquisa recrutou participantes de fevereiro de 2021 a março de 2022. A coorte de doadores saudáveis ​​(n = 148) que doaram amostras de sangue venoso consistia principalmente de funcionários universitários e estudantes participantes do serviço de triagem COVID-19 da Universidade de Cardiff ou funcionários de uma escola primária em Cardife.Todos os participantes eram saudáveis ​​e não relataram tomar quaisquer medicamentos imunossupressores (ver Tabela 1 para características).A coorte de participantes que doaram amostras de sangue capilar incluiu todos os doadores voluntários (com mais de 18 anos) de todo o Reino Unido.Entre 24 de janeiro e 14 de março de 2022, foram inscritos no estudo 342 participantes, dos quais 299 submeteram amostras de sangue ao laboratório.Muitos participantes não foram vacinados e/ou relataram comorbidades graves, incluindo doenças autoimunes e câncer (ver Tabela 1 para características).Este estudo recebeu aprovação ética do Comitê de Ética em Pesquisa de Newcastle e North Tyneside 2 (ID IRAS: 294246) e do Comitê de Ética em Pesquisa da Escola de Medicina da Universidade de Cardiff (SREC ref: SMREC 21/01).Todos os participantes deram consentimento informado por escrito antes da inclusão.Os participantes não receberam qualquer remuneração pela participação neste estudo.
Amostras de sangue venoso foram obtidas por punção venosa em vacutainers de heparina de lítio ou sódio (BD) de 6 ou 10 ml.Amostras de sangue capilar foram obtidas com lanceta digital e posteriormente coletadas em microcontêineres de heparina (BD).É necessário um mínimo de 400 µl de sangue;qualquer amostra inferior a este valor será rejeitada.Outras razões para a rejeição da amostra incluíram coagulação maciça e/ou hemólise e falha na coleta de plasma viscoso para análise (Figura 5 suplementar).Um total de 299 amostras de sangue capilar estavam disponíveis para avaliar as respostas de anticorpos, das quais 270 amostras também estavam disponíveis para avaliar as respostas das células T.
As respostas de células T específicas do SARS-CoV-2 foram avaliadas usando o ensaio COVID-19 Immuno-T (ImmunoServ Ltd) e realizadas conforme descrito anteriormente14.Resumidamente, um vacutainer venoso de 6 ml ou 10 ml de heparina sódica (BD) foi retirado de cada participante e processado no laboratório dentro de 12 horas após a coleta de sangue.Embora a maioria das amostras tenha sido processada em 24 horas, um sangue capilar de microsangramento (BD) heparinizado de 400 a 600 μl foi coletado em 48 horas após a amostragem por punção digital.Amostras de sangue venoso e/ou capilar foram estimuladas com conjuntos separados de peptídeos específicos para SARS-CoV-2 (variante de tipo selvagem), conforme descrito anteriormente14.Esta biblioteca de peptídeos contém 420 sequências de 15-meros com 11 aminoácidos sobrepostos abrangendo toda a proteína spike (S1 e S2) (S; proteína NCBI: QHD43416 1), fosfoproteína do nucleocapsídeo (NP; proteína NCBI: QHD43423 2) e glicoproteína de membrana (M ; proteína NCBI: QHD43419 1) sequências de codificação (referidas como “biblioteca de peptídeos combinatórios S-/NP-/M”).Todos os peptídeos foram purificados a> 70%, dissolvidos em água estéril e utilizados a uma concentração final de 0,5 μg/ml por peptídeo.As amostras foram incubadas a 37°C durante 20-24 horas.Os tubos foram então centrifugados a 5000xg durante 3 minutos e ~150 µl de plasma foram coletados do topo de cada amostra de sangue.Armazene as amostras de plasma a -20°C por até um mês antes de realizar ensaios de detecção de citocinas/anticorpos.
O IFN-γ foi medido utilizando o IFN-γ ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, número de catálogo 430116) e realizado de acordo com as instruções do fabricante.Imediatamente após a adição da solução de parada (H2SO4 2N), a microplaca foi lida a 450 nm usando um leitor de placas BioLegend Mini ELISA.O IFN-γ foi quantificado por extrapolação de curva padrão usando GraphPad Prism.Valores abaixo do limite de detecção inferior do ensaio foram registrados como 7,8 pg/ml, valores acima do limite de detecção superior do ensaio foram registrados como 1000 pg/ml.
Os anticorpos anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N IgG foram medidos usando um painel Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex (Bio-Rad, cat. no. 12014634) e rotulados de acordo com instruções do fabricante .instruções.As amostras que relataram valores acima do limite de quantificação foram reanalisadas na diluição de 1:1000.A intensidade média de fluorescência das esferas foi medida num instrumento Bio-Plex 200 (Bio-Rad).As concentrações de anticorpos foram calculadas pelo ensaio de controle único VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) e convertidas em unidades padrão de referência internacional WHO/NIBSC 20/136 (BAU/mL) usando o fator de calibração do fabricante.
Anticorpos neutralizantes específicos da subunidade RBD e S1 contra linhas SARS-CoV-2 de tipo selvagem e delta (B.1.617) SARS-CoV-2 foram medidos usando o kit Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio -Rad, peça nº 12016897), de acordo com as instruções do fabricante.Meça a intensidade média de fluorescência no Bio-Plex 200 (Bio-Rad) e calcule a inibição percentual (ou seja, neutralização) usando a seguinte fórmula:
Ensaios de neutralização infecciosa para SARS-CoV-2 foram realizados conforme descrito anteriormente28.Resumidamente, 600 PFU de SARS-CoV-2 de tipo selvagem foram incubadas com diluições em série de 3 vezes de plasma em duplicado durante 1 hora a 37°C.A mistura foi então adicionada às células VeroE6 durante 48 horas.As monocamadas foram fixadas com paraformaldeído a 4%, permeabilizadas com NP-40 a 0,5% e incubadas por 1 hora em tampão de bloqueio (PBS contendo tween a 0,1% e leite desnatado a 3%).O anticorpo primário (anti-nucleocapsídeo 1C7, Stratech) foi adicionado ao tampão de bloqueio durante 1 hora à temperatura ambiente.Após a lavagem, um anticorpo secundário (IgG-HRP anti-murganho, Pierce) foi adicionado ao tampão de bloqueio durante 1 hora.As monocamadas foram lavadas, reveladas utilizando Sigmafast OPD e lidas num leitor de placas Clariostar Omega.Poços sem vírus, sem vírus mas sem anticorpos e soros normalizados apresentando actividade intermédia foram incluídos em cada experiência como controlos.
A análise estatística foi realizada no GraphPad Prism (versão 9.4.1).A normalidade do conjunto de dados foi testada por meio do teste de Shapiro-Wilk.Critérios não paramétricos foram utilizados para todas as comparações.O teste de Mann-Whitney foi utilizado para amostras não pareadas.Todos os testes foram bilaterais com um limiar de significância nominal de P ≤ 0,05.
A análise exploratória inicial do conjunto de dados foi feita em R (versão 4.0.3).Isso inclui o desenvolvimento da matriz de correlação de postos univariada de Spearman, onde a correlação entre duas variáveis ​​é representada pelo tamanho e pela cor dos quadrados.A significância estatística entre as associações foi calculada por meio do rho de Spearman, onde valores ≤0,05 foram considerados significativos.As comparações que não foram estatisticamente significativas foram excluídas da matriz e marcadas com células em branco.Os valores de P foram ajustados para comparações múltiplas usando a correção de Holm.Um modelo de regressão logística binária foi utilizado para simular o efeito das variáveis ​​do conjunto de dados na resposta positiva à COVID-19.As respostas das células T IFN-γ e as pontuações dos títulos de IgG anti-RBD/S1/S2/N foram convertidas em fatores, onde cada indivíduo foi atribuído ao quartil apropriado para cada pontuação.Em seguida, foi desenvolvido um modelo inicial de pesquisa utilizando a função glm do pacote estatístico (V4.0.3).As razões de chances derivadas deste modelo original foram extraídas dos coeficientes do modelo usando a função 'odds_plot' no pacote OddsPlotty (V1.0.2).Ao desenvolver o modelo de validação cruzada, usamos a função “bestglm” do pacote bestglm (V0.37.3) para limitar o preconceito do usuário e garantir que o melhor subconjunto de preditores possa ser selecionado.O método escolhido foi o “exaustivo” e o critério de informação utilizado para avaliar o ajuste do modelo foi o AIC.O mesmo fluxo de trabalho descrito acima foi utilizado para obter a razão de chances.
Para obter mais informações sobre o desenho do estudo, consulte o resumo do estudo da Nature vinculado a este artigo.
Cartas e solicitações de materiais devem ser direcionadas ao Dr. Martin Scarr ou ao Professor Andrew Godkin.Este artigo fornece os dados originais.
O código R utilizado para criar modelos estatísticos está disponível publicamente sem solicitação29.Informações sobre reimpressão e licenças podem ser encontradas em www.nature.com/reprints.
Munro, APS et al.Segurança e imunogenicidade de sete vacinas contra a COVID-19 como terceira dose (reforço) após duas doses de ChAdOx1 nCov-19 ou BNT162b2 (COV-BOOST) no Reino Unido: um ensaio de fase 2, cego, multicêntrico, randomizado e controlado.Lanceta 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV et al.Imunogenicidade, segurança e reatogenicidade da vacinação primária heteróloga contra COVID-19 (Com-COV2) usando mRNA, vetores virais e vacinas adjuvantes proteicas no Reino Unido: um ensaio de fase 2, simples-cego, randomizado, teste de não inferioridade.Lanceta 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB et al.Eficácia das vacinas COVID-19 em pacientes imunocomprometidos: uma revisão sistemática e meta-análise.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. et al.Neutralização diminuída da variante B.1.1.529 do mícron SARS-CoV-2 pelo soro após a imunização.Lanceta 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y e Baliser RD Infecção inovadora em indivíduos vacinados com SARS-CoV-2: medição, causas e consequências.Padre Nacional de Imunologia.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG et al.Resposta imune humoral enfraquecida à vacina BNT162b2 Covid-19 por 6 meses.N. eng.J. Medicina.385, e84 (2021).
Carreño, JM et al.Atividade de soros convalescentes e vacinais contra SARS-CoV-2 Omicron.Natureza 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. et al.Duração da proteção da vacina de mRNA do Catar contra as subvariantes SARS-CoV-2 Omicron BA.1 e BA.2.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ et al.A frequência das células B de memória diminui com a infecção disruptiva da vacina delta COVID-19.Medicina Molecular EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. et al.As células T de memória com reatividade cruzada estão associadas à proteção dos contatos com COVID-19 contra a infecção por SARS-CoV-2.Comuna nacional.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH et al.Respostas distintas de células T e células B reativas a omícrons do SARS CoV-2 em receptores da vacina COVID-19.a ciência.Imunologia.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu et al.Células T herdadas específicas para SARS-CoV-2 reconhecem variantes Omicron de forma cruzada.Medicina nacional.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ et al.A medição de células T específicas para SARS-CoV-2 no sangue total revela infecção assintomática e imunogenicidade da vacina em indivíduos saudáveis ​​e pacientes com câncer de órgãos sólidos Imunologia https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT et al.Medição rápida de células T com pico de SARS-CoV-2 no sangue total de indivíduos vacinados e naturalmente infectados.J. Clínico.investir.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, UE et al.Resposta à vacina COVID-19 em pacientes com esclerose múltipla.instalar.Neurônios.91, 89–100 (2022).
Bradley RE et al.A infecção persistente por COVID-19 com síndrome de Wiskott-Aldrich desapareceu após vacinação terapêutica: relato de caso.J. Clínico.Imunologia.42, 32–35 (2022).